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手艺文章
TECHNICAL ARTICLES
更新时间：2020-11-06
点击次数：2214
酿酒酵母突变文库是系统生物学研究的理想模子。。。。。因此酵母菌文库有很是主要的意义，，，，但由于其含有标记标签和协调因子的较量有数，，，，要构建是很是腾贵和艰辛的。。。。。
—Nat Methods. 2016 Apr; 13(4): 371–378.
事实证实，，，，系统性文库对酵母菌内的全基因组研究有重大的意义—实例包括酵母基因敲除文库和酵母GFP文库。。。。。每个文库都能让人们对酵母生物学的各个方面举行全新的熟悉，，，，然而，，，，建设酵母文库需要支付重大的起劲，，，，这经常掩饰了酵母文库自己的价值。。。。。无休止的转化、挑取、克隆和验证事情，，，，本钱重大，，，，事情流程冗长，，，，使科学家对解决其他新的生物学问题望而却步。。。。。
海德堡大学Michael Knop实验室的Anton Khmelinskii和Matthias Meurer开发了一种无缝基因标记要领，，，，以减轻文库构建历程中面临的问题。。。。。他们与以色列魏茨曼科学研究院的Maya Schuldiner实验室的IdoYofe和Uri Weill一起，，，，将这种要领进一步生长为SWAp-Tag法。。。。。使用ROTOR，，，，此要领可以在短短三周内快速构建文库。。。。。
文章泉源：(2016) One Library to make them all: Streamlining yeast library creation by a SWAp-Tag (SWAT) strategy. Nature methods 13: 371-378
作者：Yofe, I., Weill, U., Meurer, M., Chuartzman, S., Zalckvar. E., Goldman, O., Ben-Dor, S., Schütze, C., Wiedermann, N., Knop, M., Khmelinskii, A. and Schuldiner, M.
SWAp-Tag (SWAT)手艺
SWAp-Tag（SWAT）法依赖于初始受体库的天生。。。。。该受体库充当模板，，，，可以以“即插即用”的方法交流到其他文库中。。。。。
该文库的构建要领很有特色，，，，由于它需要一个一次性古板要领构建的受体菌株文库，，，，受体� ？？？？？椴迦氲揭阎幕蜃槲恢�。。。。。通过将受体文库与含有表达所需要� ？？？？？榈墓┨逯昱涠裕�，，可以用新的标记、启动子或其他所需的基因组序列替换该受体� ？？？？？�。。。。。这样可以轻松，，，，准确且经济高效地建设无数个新的文库。。。。。
SWAT法可以快速直接地天生系统文库：
（a）整合SWAT受体� ？？？？？樵贜'最后标记卵白质。。。。。
（b）使用ROTOR让受体菌株与供体菌株杂交来天生新文库。。。。。再用ROTOR来选择单倍体孢子并诱导I-SceI表达。。。。。
（c）潜在的供体质粒（顶部），，，，可用于建设基因标记文库（底部）
SWAT手艺的特点：快速、无邪、免费
Schuldiner和Knop实验室建设了一种立异的、极其快速的文库构建要领，，，，它可以通过合成差别� ？？？？？椋�，，轻松天生文库，，，，而不是重新最先为每个� ？？？？？榻ㄉ栊碌奈目�。。。。。在获得或构建一个受体文库后，，，，一个新的文库可以在短短三周内天生，，，，并可以连忙用于全基因组研究。。。。。Schuldiner实验室已经建设了一个原始的受体N' -SWAT文库，，，，该文库的N端标记为组成性表达的GFP。。。。。别的，，，，别的，，，，使用SWAT法从原始受体库中又获得了另外两个文库：N’mCherry-tag库和N’ GFP库。。。。。现在可以从Maya Schuldiner教授已揭晓的SWAT文库中免费获得GFP-tag、mCherry-tag或GFP荧光文库。。。。。
这种要领的瓶颈是杂交和筛选的办法。。。。。Schuldiner和Knop实验室使用Singer Instruments公司的ROTOR来突破这些瓶颈。。。。。因此，，，，用ROTOR处置惩罚菌株，，，，杂交、产孢，，，，标签交流筛选/计数筛选、被用来处置惩罚所有的应变，，，，交配和产孢程序，，，，标签交流选择/反选择，，，，以及在文库中筛选乐成的集成� ？？？？？�。。。。。
这一迅速的历程意味着科学家可以在他们无邪地建设和可视化从未见过的卵白质。。。。。标签介导的定位问题已通过SWAp-TAG要领解决，，，，由于它使ORFs可以在5'或3'最后举行标记，，，，大幅地镌汰错位或卵白质不稳固的影响。。。。。
“Creation of new libraries would not have been possible without our Singer ROTOR robot”.
——Prof. Maya Schuldiner – 2017
SWAT手艺的应用和意义
从理论上讲，，，，任何标签都可用于从N’-SWAT受体库中构建新的文库。。。。。该标签可以用于共定位研究的差别颜色荧光，，，，也可以是用于丈量卵白质-卵白质相互作用的互补标签。。。。。一旦天生了C’-SWAT受体文库，，，，无论是定量转录和翻译效果的启动子、UTR照旧其他非编码DNA，，，，基因5’或3’最后的任何部分都可以被修改。。。。。半衰期可以用准时荧光来研究，，，，或用下拉标签来疏散卵白质。。。。。
SWAT法天生文库，，，，节约了许多名贵的时间，，，，使研究职员可以设计更多有意义的实验，，，，这也为系统探索细胞生物学的未知领域翻开了一扇大门。。。。。Schuldiner实验室已经将N'SWAT文库用于共定位筛选、过表达筛选以及体内视察相互作用。。。。。正如Schuldiner教授所说：“兴趣无限！”。。。。。
ROTOR
合适的工具是实验乐成的要害
